1. 핵산 정량 계산의 기본
핵산은 [ OD 260nm X DNA or RNA상수 X 희석배수 = ug/ml ] 식을 사용해서 정량한다.
OD는 btical Density(흡광도)의 줄임 말이고, 핵산의 경우 정량에 260nm 파장의 빛을 사용한다.
OD 값이 1일때 그 안에 들어 있는 핵산의 농도(ug/ml 단위)를 상수처럼 사용해서 계산에 사용한다.
(*정량시 260nm에서 흡광도 1일 때의 RNA 농도 값은 40ug/ml이고, DNA는 50ug/ml인데
이처럼 RNA의 값을 DNA에 비해 낮게 설정하는 이유는 RNA의 흡광도가 더 높기 때문이다. )
예를 들어서 DNA 추출 시료를 녹인 용매 100μl 중 10μl를 취해 이를 100배 희석한 후 OD값이 0.400이 나왔다면,
시료 10 μl 중 DNA 총량이 몇 ug인지는 다음과 같이 계산할 수 있다.
먼저 [ OD 260nm X DNA 상수 X 희석배수 = ug/ml ] 식을 사용하면
0.400 * 50 ug/ml * 100 = 2000ug/ml 라는 값을 얻을 수 있고 이는 시료 1ml 당 2000ug의 DNA가 들어있음을 뜻한다.
그런데 계산을 요하는 시료의 양은 10μl = 0.01ml 이므로,
2000ug/ml*0.01ml를 하면 시료 10 μl 중 DNA 총량은 20ug이다.
2. 1ug/1ul 시료 만들기
시료를 1ug/1ul로 만들어주면 핵산 정량에 이어지는 실험에서 편리하게 사용할 수 있다.
가령 1번의 방식으로 정량한 시료의 DNA량이 6.25ug/ul 나왔을 때,
이 시료를 1ug/1ul 용액으로 바꾼 후 사용하는 것이다.
6.25ug/ul 가지고 1ug/1ul만들려면 DNA free water를 타서 분자, 분모의 수를 1대 1로 만들어 주면 된다.
즉 시료 1ul을 취하여 DNA free water 5.25ul을 넣어주면 분모는 6.25ul이 되고,
분자에 해당하는 시료 1ul에 들어있던 DNA는 6.25ug이었으므로 1ug/1ul 가 된다.
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